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北京博尔迈生物技术有限公司
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MHC  Tetramers,MHC 四聚体
[宣传册子]   [产品列表]


1. MHC四聚体简介和原理

2. MHC四聚体的制备方法

3. MBL 的 MHC 四聚体特点:极低的CD8非特异结合

染色例1

染色例2

4. MHC 四聚体相关产品

5. MHC 四聚体产品说明手册

6. MHC四聚体的产品服务分类

MHC class I HLA-E Tetramer  [产品列表]

WT1特异性的CTL的诱导和检测  [产品列表]

Mouse MHC class II Tetramer  [产品列表]

Human HLA class II Tetramer  [产品列表]

CD1d Tetramer  [产品列表]

MHC 四聚体定制服务  



MHC四聚体简介和原理


Class I 和 Class II MHC四聚体产品能够快速简单地检测抗原特异性T细胞。MHC四聚体技术是基于MHC-多肽复合物能够在单细胞水平识别抗原特异性T细胞的能力。这项突破性的的技术使研究者能够精确地测量目标T细胞对感染、癌症和自身免疫疾病的反应。

MBL的T-Select MHC四聚体主要使用FITC、PE或者APC标记,可以检测全血,外周血单核细胞(PBMCs),扩展细胞系等样品。MHC四聚体主要用于T细胞免疫分析,检测抗原特异性T细胞的免疫应答被认为是评价疫苗和疗法的抗癌或抗病毒效果的最重要的指标。



大部分T淋巴细胞在细胞表面表达单一的,高度特异性的抗原受体(TCR)。TCR(T cell receptor)与MHC-多肽复合体结合识别MHC上的抗原多肽。这种相互作用使获得性细胞免疫发生,例如:细胞介导免疫和体液免疫。因为TCR的亲和力较低,跟MHC-多肽复合体解离速度较快,单体的MHC-多肽复合物不能用于检测抗原特异性T细胞。

Altman等开发了MHC四聚体技术用于检测抗原特异性T细胞。MHC四聚体增强了与TCR的亲和力,使得使用流式细胞术就可以在体外准确地检测抗原特异性T细胞。

MHC 的具体的制备方法


 

制备MHC I类分子四聚体,由Altman等建立的MHC/肽四聚体技术得到广泛的应用。

Altman 等,将MHC class I/肽四聚体作为探针,定量检出体内抗原特异性CTL。(Science 1996, 274: 94−96)。
Bodinier等、将HLA class I heavy chain α3 结构域中加入单点突变(A245V),有效地降低了CD8的非特异性结合,将其特异性大大地提高。(Nat. Med. 2000, 6: 707−710)。

因此,T-Select Human HLA class I Tetramer是用在α3结构域加入变异的HLA class I heavy chain做成的。制作过程如右图所示。在大肠杆菌表达的重组蛋白 MHC class I heavy chain和β2-microglobulin(β2m)中加入抗原肽链并进行折叠复合后,形成可溶性的MHC复合单体。

然后,将复合单体中的MHC class I heavy chain的C端上的赖氨酸残基与BirA酶作用,生物酰化该复合物。将生物酰化复合单体通过柱层析的方法纯化。再将纯化后的生物素化MHC复合单体与一个标记了荧光素的链霉亲和素结合,形成四聚体,从而完成 T-Select MHC Tetramer的制备。


MBL的 MHC 四聚体特点


极低的CD8非特异结合

T细胞表面的CD8分子通过与 HLA Class I 分子结合增强了T细胞的抗原识别能力。因此,MBL开发了带有HLA α3结构域单点突变(Ala245Val)的T-Select HLA class I Tetramer,这有效地降低了CD8-HLA非特异性结合。这种特变的四聚体只有极低的CD8非特异性结合的同时保留了TCR特异性结合能力。

通过HLA突变降低了CD8非特异性结合,这极大地提高了HLA-多肽多聚体的特异性。




参考论文
1) Gao GF, et al., Nature 387: 630−634 (1997)
2)
Bodinier M, et al., Nat. Med. 6: 707−710 (2000)

 

染色例1HLA-A*02:01 CMV pp65 Tetramer

 


 

使用HLA-A*02:01 CMV pp65 Tetramer 试剂,将HLA-A*02:01 阳性CMV阳性患者外周和,HLA-A*02:01阴性外周进行染色。从实验结果可以看出,使用HLA class I heavy chain α3结构域中加入单点突变的T-Select MHC Tetramer试剂(下)和,没有加入单点突变的Tetramer试剂(上),表现的特异性有明显的差别。

T-Select HLA class I Tetramer通过在HLA class I heavy chain α3中加入突变降低了CD8非特异性结合,这极大地提高了HLA-多肽多聚体的特异性。

French Application NumberFR9911133

 

染色例2HLA-A*24:02 EBV BRLF1 Tetramer


HLA-A*24:02性健康人外周血中分离PBMC,利用MLPC法将诱导的EBV BRLF1 CTL lineHLA α3结构域加入单点突变的HLA-A*24:02 EBV BRLF1 Tetramer-PE (MBL code no. TS-M002-1)HLA-A*24:02 Negative Tetramer-PE (MBL code no. TS-M007-1) HLA α3结构域中没有加入突变的HLA-A*24:02 EBV BRLF1 Tetramer-PE分别进行染色。

结果显示,HLA α3结构域中没有加入变异的TetramerCD8阳性细胞中发现了非特异染色。而用HLA α3结构域中加入变异的Tetramer则没有发现非特异性染色。

本数据是用淋巴栅胞和7-AAD性栅分析得到。



MHC 四聚体相关产品

癌相关 T-Select MHC class I Tetramer
病毒相关 T-Select MHC class I Tetramer

MHC 四聚体产品说明手册


    MBL提供了一系列MHC四聚体产品,产品特异性高。

    MBL也提供四聚体定制服务。

   PDF版:3.63MB